舒冬梅,王德良,宋绪磊,尚柯

• 1:新疆农业大学食品科学与药学学院
• 2:中国食品发酵工业研究院

摘要(Abstract)：

为提高酱油发酵菌种米曲霉的蛋白酶活力,采用实验室保藏菌种H0米曲霉为诱变出发菌株,对H0菌株进行常压室温等离子体诱变(ARTP),诱变条件:功率120 W;气流量10L/min;10个时间梯度处理。结果表明:当诱变时间为140s时,致死率接近90%,此时为最佳诱变时间。利用大豆球蛋白作为选择培养基关键因子进行初筛和96孔板高通量复筛,选出3株高蛋白酶活力菌株H5,H12,H15,并且经过福林酚法验证。最终筛选出米曲霉菌株H15具有高蛋白酶活力:酸性、中性、碱性蛋白酶活力分别为192.35,1816.31,3774.82U/g,比出发菌株H0分别提高17.49%,19.08%,10.66%。

关键词(KeyWords)： 常压室温等离子体诱变(ARTP);高通量筛选;蛋白酶活力

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 科技部科研院所基金项目(2014EG111217)

作者(Author): 舒冬梅,王德良,宋绪磊,尚柯

参考文献(References)：

• [1]陈红梅,潘力.米曲霉3.042种曲蛋白酶特性研究[J].中国调味品,2009,34(3):63-71.
• [2]徐德峰,赵谋明.中国酱油菌株AS 3.951的改良现状与思考[J].中国调味品,2009,34(5):32-38.
• [3]Yasuhara A,Ogawa A,Tanaka T,et al.Production of neutral protease fromAspergillus oryzae by a novel cultivation method on a microporous membrane[J].Biotechnology Techniques,1994,8(4):249-254.
• [4]邓静,吴华昌,吴明霞,等.米曲霉产蛋白酶条件的优化[J].中国酿造,2008,27(12):51-53.
• [5]孙春华.米曲霉菌株的诱变选育及其制剂的应用研究[D].泰安:山东农业大学,2008.
• [6]唐洁.利用原生质体融合技术进行米曲霉新菌株的选育[D].成都:西华大学,2007.
• [7]韩志双,刘军,郇阿梅,等.应用基因组改组技术选育米曲霉酸性蛋白酶高产菌株[J].中国调味品,2015,40(1):18-22.
• [8]袁艳玲,杨生玉,钱深,等.米曲霉中性蛋白酶高产菌株的复合诱变选育[J].科技信息,2013,15(1):69-58.
• [9]Li H P,Li G,Sun W T.Radio-frequency,atmospheric-pressure glow discharges:producing methods,characteristics and applicationsin bio-medical fields[C].Complex Systems:5th International Workshop on Complex Systems.AIP Conference Proceedings,2008,98(2):584-591.
• [10]Li G,Li H P,Wang L Y,et al.Genetic effects of radio-atmospheric pressure glow discharges with helium[J].Appl Phys Lett,2008,92(22):221504.
• [11]Laroussi M.Nonthermal decontamination of biological media by atmospheric-pressure plasmas:review,analysis,and prospects[J].IEEE Transactions on Plasma Science,2002,30(4):1409-1415.
• [12]王方方,孙沛勇,银会娟,等.常压室温等离子体快速诱变酒精酵母及其突变株的特性研究[J].中国酿造,2013,10(8):117-119
• [13]Liu Rongming,Liang Liya,Ma Jiangfeng,et al.An engineering Escherichiacoli mutant with high succinic acid production in the defined medium obtained by the atmospheric and room temperature plasma[J].Process Biochemistry,2013,48(11):1603-1609.
• [14]万青,曹伟佳,张常青,等.常压室温等离子体诱变高效利用木糖产丁二酸菌株[J].生物工程学报,2013,29(11):1692-1695.
• [15]陈锡剑,陈建华.常压室温等离子体诱变选育高产曲酸米曲霉[J].化学与生物工程,2015,32(5):52-60.
• [16]高献礼,赵斯薇,孙鹏飞,等.酱油渣蛋白质的分离、鉴定和氨基酸组成特征研究[J].现代食品科技,2013,29(10):2512-2516.
• [17]SB/T 10317-1999,蛋白酶活力测定法[S].
• [18]范新蕾,肖成建,顾秋亚,等.ARTP诱变选育葡萄糖氧化酶高产菌株及发酵条件优化[J].工业微生物,2015,45(1):15-19.