唐艳,吴涛,王成,孟月

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摘要(Abstract)：

建立了一种核苷磷酸化酶酶活的检测方法,解决了工业化磷酸化酶质量无法判定的难题。建立核苷磷酸化酶的反应体系,以10 g/L肌苷、10 g/L三聚磷酸钠为底物,最适反应温度40℃,pH 4.5,反应10 min,使肌苷在磷酸化酶的作用下生成肌苷酸二钠(IMP)。通过高效液相色谱法(HPLC)测定IMP的生成量,液相色谱条件:采用C18色谱柱,以0.02 mol/L磷酸二氢钾∶乙腈为99.5∶0.5(V/V)为流动相,1 mL/min等度洗脱,40℃,紫外检测器(λ=254 nm),进样量2μL。此方法测定结果准确,回收率>99.5%,重现性好,RSD<0.5%。核苷磷酸化酶酶活检测方法的建立能精准地判定酶液产品指标,准确地计算酶添加量,解决了酶催化反应终点无法判定的问题。

关键词(KeyWords)： 磷酸化酶;酶活力;肌苷;肌苷酸二钠(IMP);高效液相色谱法(HPLC)

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 河北省氨基酸工程技术研究中心创新平台建设资助项目(131000021)

作者(Author): 唐艳,吴涛,王成,孟月

参考文献(References)：

• [1]何峰，李科，张晓红，等.不同有机氮源对发酵法生产肌苷影响的研究[J].中国酿造，2018(4):88-92.
• [2]刘国生，王玉娟，黄倩，等.肌苷发酵过程腺嘌呤含量变化规律[J].食品科学，2013(15):201-204.
• [3]张小兰.肌苷产业化工艺控制及发酵条件研究[D].广州：华南理工大学，2014.
• [4]黄国华，薛乾隆，岳秉宏，等.肌苷注射液联合醒脑静治疗DEACMP的临床研究[J].西南国防医药，2019,29(4):36-38.
• [5]Glander P,Waiser J,Hambach P,et al.Inosine 5'-monophosphate dehydrogenase activity for the longitudinal monitoring of mycophenolic acid treatment in kidney allograft recipients[J].Transplantation,2020.
• [6]Zhou X,Liu L,Lan X,et al.Polyunsaturated fatty acids metabolism,purine metabolism and inosine as potential independent diagnostic biomarkers for major depressive disorder in children and adolescents[J].Molecular Psychiatry,2018,24(10):1478-1488.
• [7]张昆，邝芳，闫飞，等.肌苷对糖尿病性膀胱病的保护作用及机制[J].医学研究生学报，2018,31(1):5-12.
• [8]江磊.肌苷治疗严重脓毒症35例疗效评价[J].中国药业，2015(12):40-42.
• [9]韩星月，吴涛，王成，等.呈味核苷酸生产方法研究进展[J].发酵科技通讯，2019,48(3):146-149.
• [10]何菊华.5'-肌苷酸生产菌构建及发酵工艺研究[D].天津：天津科技大学，2015.
• [11]邱文严.基于计算机控制的新型鸡精组分建模研究[J].中国调味品，2020,45(5):166-168.
• [12]柴洋洋，王雨萱，艾凯，等.茶树菇呈味物质的提取及鲜味剂的研究[J].中国调味品，2020,45(3):8-13,17.
• [13]沈浥.调味品中呈味核苷酸的研究进展和我国标准化现状[J].中国调味品，2017,42(1):177-180.
• [14]何聪芬，黄爱清，王巧娥，等.两种耐热磷酸化酶的构建及高效催化合成红景天苷[J].现代生物医学进展，2019(10):1801-1806.
• [15]晋文慧，陈晖，洪专.缢蛏酶解工艺优化及氨基酸分析研究[J].中国调味品，2020,45(8):69-73,82.
• [16]黄文武，冯纬，黄光荣.反相高效液相色谱法测定酱油中的呈味核苷酸[J].中国调味品，2019,44(1):156-159.
• [17]张倩，刘睿，王欣之，等.高效液相色谱法测定四角蛤蜊、菲律宾蛤仔中呈味核苷酸[J].食品发酵工业，2017,43(3):224-228.
• [18]王永成，陈涛，石婷，等.嘌呤核苷及其衍生物的代谢工程[J].中国生物工程杂志，2015,35(5):87-95.
• [19]Yasuhiro Mihara,Takashi Utagawa,Hideaki Yamada et al.Phosphorylation of nucleosides by the mutated acid phosphatase from Morganella morganii[J].Applied and Environmental Microbiology,2000,66(7):2811-2816.
• [20]Médic R,Garaycoechea J I,Valino A L,et al.A comparative study on phospho transferase activity of acid phosphatases from Raoultella planticola and Enterobacter aerogenes on nucleosides,sugars,and relatedcompounds[J].Applied Microbiology and Biotechnology,2014,98(7):3013-3022.